产生可靠的HPLC结果的重要建议

HPLC在分析研究和质量控制实验室中占有显著地位。有关生产过程和研究成果发表的重要决策都是基于决策，而这些决策只有在HPLC系统产生的数据具有高度可靠性的情况下才能得到。

HPLC是一个多组分体系，其结果的准确性和可靠性取决于各组分的性能水平。本文提出了一些建议，将有助于提高结果的真实性。为简单起见，将在单独的标题下讨论每个组成部分的贡献。

流动相

流动相的主要作用是将进样样品携带到色谱柱中，在色谱柱中分离后将各组分转移到检测器中进行鉴定和定量。理想情况下，在开始分析之前应该准备新鲜的流动相高效液相色谱法应使用级溶剂。溶剂应不含任何悬浮颗粒。先用0.45 μ过滤器在真空下过滤溶剂。建议进一步使用在线过滤器，以去除任何残留的悬浮颗粒。流动相溶剂应能完全混溶，进样也应能混溶。当使用缓冲液作为流动相组件时，绝不允许缓冲液在系统内部干燥，因为干燥时形成的盐会沉积，除了损坏泵组件之外，还会阻碍流动相的自由流动。

样本

像流动相溶剂一样，在进样前对样品进行过滤是一个很好的做法。大体积注射会造成峰形扭曲，因此不应使柱因大体积注射而超载。每当要开发一种新方法时，建议检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度低，尝试溶剂或溶剂组合匹配的极性流动相混合物。

列

色谱柱是高效液相色谱体系的关键组成部分。正确的护理和使用将对提供高可靠性的结果大有帮助。

操作流量和压力应逐渐改变，以使这些变化不会干扰固定相填料。使用保护柱也可以防止杂质进入主柱。由于流动相的流动依赖于温度，强烈建议使用柱烘箱，以保持恒定的柱温以保持流速的一致性。

泵

在整个分析过程中，泵需要提供流动相的一致性，并保持溶剂组成。在进行梯度分析时，需要根据软件程序使用泵来维持流动相的组成。这种情况是通过防止损坏泵部件，并在发现任何可见损坏时及时更换这些部件来实现的。根据情况允许冲洗中间极性溶剂或纯水，逐渐冲洗泵。

注射器/ autosampler

注射量的一致性是结果重现性的首要需要。手动注射器由固定体积的样品回路组成，在自动模式下，注射注射器无需操作员干预即可保持体积的一致性。

需要特别注意防止以前分析造成的污染。对于手动喷油器，要始终用足够的样品冲洗注入回路，对于自动化系统，要确保中间清洗循环是分析程序的一部分。在开始分析之前，对样品和标准可重复使用小瓶的清洁度进行验证是至关重要的。

光源

大多数HPLC分析可以使用UV光源进行。这种光源有一定的使用寿命。按照供应商的建议更换灯具将有助于提高吸光度值的可重复性。

探测器

检测器是高效液相色谱系统的最终部分，它可以确认不同样品成分的存在，并有助于对其进行定量。

建议定期对检测器进行离线清洗，并在再次使用前用清水和流动相冲洗。操作压力范围不应超过，以防止可能损坏探测器电池壁。

本文提出的建议肯定会提高结果的质量，但不用说，系统对参考化合物的定期校准是不可替代的。