峰值高度还是峰值面积?-定量色谱计算的正确选择

峰值高度还是峰值面积?-定量色谱计算的正确选择

典型的色谱图由几个大小不同的峰组成。每个峰的高度与注入色谱仪的样品混合物中存在的特定成分的数量成比例。

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理想的色谱峰

上面所示的色谱图是一个理想的色谱图,它显示了在稳定的水平基线之上上升的对称的形状的山峰。可以看到,这些峰彼此分离得很好,没有重叠或肩带。在这种情况下,在定量计算中使用峰高或峰面积是无关紧要的。

真实的样品色谱图可能不是那么简单,并且会经常显示出导致非高斯峰值的偏差,原因如下:

  • 样品混合物中存在干扰物或杂质
  • 操作参数如柱温、载流流量、注入量等的变化。
  • 隔膜取心或磨损的卡套、o形环或接头接头造成泄漏。
  • 检测器响应因化合物的性质而变化
  • 早期分析中残留的杂质。

由于这些原因,色谱图可能偏离理想的峰形状和畸变在色谱图变得明显如下所示

Real-Chromatogram
扭曲的色谱峰

在这种情况下,由于不对称的峰值响应和不稳定的基线不均匀平坦而引起并发症。基于峰高的计算将导致定量估计的误差。由于邻近的峰或重叠影响峰的高度和面积的整合,因此不能以可复制的方式整合出现的峰。对于由倾斜或嘈杂基线产生的峰值也是如此。

峰积分是用色谱软件测量峰下面积的一种数学运算。面积测量是基于积分的,假设将峰下区域划分为几个矩形,并将这些矩形相加得到峰下总面积。

为了定义这个区域,软件允许手动或自动标记峰值的开始和结束点。然后在开始点和结束点之间绘制基线,以定义面积计算。重要的是,同样的算法用于计算标准峰和样品峰的面积

峰尾的不对称往往会导致峰尾的不对称。很难重复标记这些峰值的终点。这导致了报告区域的错误,从而降低了定量测量的精度和准确性。

峰面积用于大多数定量色谱估计。峰的高度可能因形状的畸变而变化,如加宽或前峰和尾峰。然而,在这些情况下,区域不受影响,并显示出高重现性。

另一方面,对于由痕量杂质产生的非常小的峰,峰高计算可能是一个更好的选择,因为在使峰的起始和结束点的小变化中的误差变得可以忽略不计。

选择的答案是基于你对色谱质量的判断。然而,在大多数情况下,利用峰面积测量来获得最高水平的精度和精度是可取的。

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反应

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  1. 亲爱的先生,
    我需要知道如何计算单个峰的面积百分比,你能帮助吗

    1. 手工计算在今天的仪器中已被取代。该软件为您提供了在数字计数方面的峰值下的区域。它还考虑了最佳匹配,并考虑了潜在的参数,因此您可以节省大量的计算和个人判断。

  2. 你好先生,

    我需要知道的要点,你将看时,检查一批色谱图,为化验结果。关注数据完整性。

    哪些人工集成是禁止/不允许的?如何从empower/chromaleon检测到它?

    1. 现代软件在计算中考虑最佳匹配,你不必为图形细节而烦恼。手工集成可能会引入由于个人偏见而产生的错误。

  3. 为什么在高效液相色谱中需要一个信噪比。
    以及使用这个测试的目的。

    1. 信噪比对于任何方法的检出限和定量限的确定都是非常重要的。通常,LOD的信噪比为3,LOQ的信噪比为10。

  4. 你好博士。
    我想知道峰值面积的极限是多少?如果小于1000,面积看起来有效吗?

    1. 嗨,这个地区本身并不是上帝所能决定的。你需要查看信号的信噪比和响应的可重复性。因此,如果噪声的面积为100 (S/N - 10),峰值面积为1000将是好的,但如果噪声更大,它将不会。

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